蚓激酶活性的测定方法

2014年04月25日来源：中国保健食品产业网 OEM代加工网

由于蚓激酶粉具有激活纤维蛋白溶酶原变为纤维蛋白溶酶，从而溶解血栓，同时又能直接溶解血纤维蛋白，尿激酶只起激酶性质，目前还无法找到一个合适的试样作为标准对照品，故参照尿激酶琼脂糖—纤维蛋白平板法，制定了纤维蛋白平板法,采用直接测定纤维蛋白板中溶解纤维蛋白圈的大小来衡量蚓激酶粉的质量好坏。

a. 试剂配制：

（1）0.06M pH7.8磷酸盐缓冲液（PBS）

称取Na₂HPO₄·12H₂O21.4g，NaCl5.26g，加水900mL，用1N HCl调至pH7.8后，补水至1000mL。

（2）（牛）纤维蛋白原（70μ/瓶）

取70μ纤维蛋白原，溶于20mL PBS（3.5μ/mL）中，水浴微热使溶。

（3）（牛）纤维蛋白溶酶原（12μ/瓶）

取12μ纤维蛋白溶酶原，加入12 mL PBS（1酪蛋白单位/毫升）使溶，同时取3mL。

（4）（牛）凝血酶（70μ/瓶）

取70μ凝血酶，加入7 mL PBS（10μ/mL ），同时取3mL。

（5）称琼脂糖330mg，加22mL PBS，加热使溶后体积变为20 mL, 放55ºC水浴中使之恒温待用。

b.纤维蛋白板的制作：

将(2)、(5)、(3)、(4)按顺序依次加入混匀后，迅速倒入水平放置的（7.5×22.5cm）平板

中，若有气泡，可在未凝固之前，用小钢铲将气泡赶走，待其凝固后，盖上盖，放4ºC冰箱1小时后，即可使用。此板即为标准纤维蛋白板。

c. 蚓激酶粉的活力的测定：

用直径为3mm的不绣钢小管，在纤维蛋白板上打若干个小孔，称取蚓激酶粉若干（3-10mg），加蒸馏水配成1mg/mL的浓度，使其充分溶解，取溶液部份10μL点入每个小孔中，将板水平放37ºC恒温箱中保温18个小时后，测得溶圈直径（mm）。

按下列公式计算溶圈面积S=（D/2）²×3.14

蚓激酶粉的活性=S×100（μ/mg）

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